rum.MedruPRO.ru

Fixarea - elementele de bază ale histologie

Mijloacele de fixare și modul de aplicare a acestora

zăvoare aplicabile sunt împărțite în două grupe principale: 1) de fixare a substanței (un simplu cleme) -
2) rețin amestec (încuietori complexe). Există o mulțime de ambele. Acest manual conține cele mai frecvente capturi.

file simple,

Formalina (formol). Formolul este cel mai mic și cel mai frecvent fixativ. În forma sa pură este luminos, lichid puternic parfumat constând din soluție apoasă de formaldehidă 40%. Se utilizează, de preferință sub formă de soluție apoasă 10%, la care 1 parte formol (E. soluție de formaldehidă m. 40%) a fost diluat cu 9 părți de apă. O soluție este necesară pentru apa de la robinet, pentru cauze distilate umflarea țesuturilor. Utilizarea pe scară largă a formol a fost din cauza unui număr de proprietăți: a) un grad ridicat de difuzie b) capacitatea de a menține o bună formă, culoare și structura testului obekta- c) au un efect de durată de blocare (până la câțiva ani), nu afecta în mod semnificativ materiala- calitate g) și conserva grăsimi și lipide. Capacitate de difuzie ridicată și acțiune precipitării nesemnificativă a formol permite destul de repede și pătrunde adânc în țesutul, care vă permite să înregistrați bucăți de dimensiunea corpului de 1 cm sau mai mult, și, dacă este necesar, organisme destul de mari în întregime.
fixarea țesutului în timp formol de 24-48 ore. formol normal, cuprinde în general un amestec de alcool metilic și acid formic, a căror cantitate crește sub influența luminii.
După răcire, apare turbiditate în formol soluție stabilește ca un solid alb (paraformaldehida). Același sedimentul se observă pe pereții vasului și evaporarea formol. De aceea, formol trebuie depozitate în recipiente de sticlă închise ermetic inchise, la o temperatură nu mai mică de 9 ° C
Neutralizarea formaldehidă. acid formic formol dă o soluție amestec ușor acid în natură, ceea ce este nedorit în aplicarea unui număr de metode de cercetare (unele reacții histochimice argintare soluție de azotat de argint). Procesul este destul de simplu formol neutralizare: carbonat de calciu turnat într-un vas (sau carbonat de magneziu), într-o cantitate astfel încât partea de jos a grosimii stratului format de 1,5-2 cm formol apoi turnat de mai multe ori agitat viguros și lăsat să stea 24-48 h .. în acest timp, soluția este neutralizată.
Efectele secundare ale formol. depozitarea pe termen lung a medicamentelor într-o soluție concentrată de formol conferă țesuturilor excesive de densitate, ceea ce complică și mai mult manipularea și deteriorează calitatea preparatului. Poate elimina acest dezavantaj prin plasarea materialului la 2 săptămâni într-o soluție de nitrat de argint 1% sau cu soluție de acid citric 10%. Depozitarea pe termen lung într-o soluție de formalină 10%, de asemenea, duce la o umflare a obiectului, care trebuie sa fie amintit atunci când este măsurată după fixare.
La fixarea în preparate formol apare adesea întuneric precipitat brun cristalin - rezultatul interacțiunii cu țesuturile formol sunt în hemoglobină. Acesta a fost îndepărtat prin plasarea secțiunilor necolorate 1-5% soluție de amoniac sau 70% alcool etilic pentru diferite perioade (de la 5 minute la 4 ore). Preparatul a fost apoi spălat bine cu și sunt prelucrate în continuare.
Trebuie amintit întotdeauna că efectul pe termen lung al vaporilor de formol irita membranele mucoase. Umezirea efect de bronzare a pielii face formol, și după repetate frecvent eczema de contact este uscat. De aceea, înainte de disecție preparatelor de formol slaboammiachnuyu plasate în apă (miros) și lucrul cu mănuși de cauciuc (dacă este posibil, sub dispozitivul de aspirație).
alcool etilic. Acțiunea de blocare se realizează datorită retragerii apei din proteinele tisulare și de coagulare. În ciuda unui număr de alcool proprietăți negative (contracția celulei, ca urmare a retragerii rapide a apei, dizolvarea și extracția grăsimilor și a hemoglobinei), este ca fixativ este utilizat pe scară largă în tehnica microscopică. Acest lucru se datorează faptului că alcoolul etilic realizează o fixare rapidă, care nu necesită desecare țesături înainte de a turna în parafină și celloidin. Fiind substanță inactivă chimic, un alcool este deosebit de adecvat studiile când histochimice. Este bine conservată substanță precum mucină, glicogen, acid uric, fier, calciu, care sunt ușor solubile în alte lichide de reținere.
Cel mai des utilizat 96% și etanol absolut. Unii autori recomanda, de asemenea, o concentrație de 80 și 90%. Timp de fixare depinde de materialul :. pentru filme subțiri - 15-30 de minute în bucăți de 3-4 mm grosime - 2-4 h, datorită faptului că alcoolul este mai ușor decât apa, aceasta, extragerea din țesuturi, chiuvete la fund. Prin urmare, în bucățile de material trebuie să anexeze în mod necesar un strat gros de vată. droguri excesiv rămâne în alcool provoacă țesut sigiliu excesivă, ceea ce este rău pentru prelucrarea ulterioară.
alcool metilic (metanol). lichid incolor, în formă pură seamănă cu alcoolul etilic miros, aceeași tehnică (brut) metanol are un miros neplăcut, cauzată de un amestec de alte substanțe. Tehnica microscopice este folosită sub formă de alcool absolut lipsit de impurități pentru frotiurilor de sânge de fixare. Cel mai bine este de a utiliza metanol pentru a oferi analize.
Trebuie reamintit faptul că metanolul este o otravă puternică, care necesită respectarea regulilor de utilizare și de depozitare prevăzute pentru substanțele toxice din grupa A.
Acetonă. In ultimii ani, tot mai mult utilizate în laboratoarele histologice în scopul fixării histochimic este datorită ușurinței cu acetonă, posibilitatea unui remediu rapid și să-l mențină după mulți compuși chimici, incluzând activitatea multor enzime. Dezavantajul -Violation structura subțire citologice. S-a adăugat Folosiți fie incolor (anhidru). Blocarea poate fi la fel de bucăți de țesut (vezi. P. 157) și secționate. Preparat într-un criostat secțiuni îndreptat perie pe diapozitiv a fost transferat într-o ceașcă sigilată cu rece (5-10%) și acetonă este plasată într-o baie de gheață uscată sau în camera criostat. fixarea timpului depinde de grosimea secțiunilor (5-10 m în medie, pot fi stocate timp de câteva zile).
Printre alte mijloace de fixare trebuie menționat diclorura de mercur (sublimat coroziv), săruri ale metalelor grele (cobalt, platină, uraniu și altele asemenea. D.), și acid (acid acetic, acid tricloracetic, picric, osmiu, crom etc.). În formă pură, acești compuși sunt rar folosite, dar ele sunt parte integrantă a multor amestecuri de fixare.

Fixarea amestec (încuietori complexe) și utilizarea acestora

Liquid Muller. La momentul aplicării sale în forma sa pură este limitată. Cu toate acestea, ea servește ca o soluție stoc pentru prepararea unor astfel de fixatori comune ca fluid Zenker, Horta, Maksimov et al Structure .:
dicromat de potasiu 2,5g
Sulfat de sodiu 1 g
Apă distilată 100 ml
Pentru o mai bună dizolvare a dicromat de potasiu este recomandat pentru a încălzi apa.
fluid (amestec sulemovaya) Zenker. Una dintre cele mai bune clipuri pentru a face pregătirile și pregătirile de revizuire pentru o serie de studii histologice subtiri. Acesta oferă țesuturi bune Vopsirea. Compoziția și metoda de utilizare:
100 ml Mueller diclorura de mercur lichid (HgCl2) 5 g de acid acetic glacial, 5 ml
(Adăugat direct la o cantitate egală de formol poate fi înlocuită cu Galeră înaintea upotrebleniem-).
Grosimea pieselor înregistrate nu trebuie să depășească 5 mm. Timpul de fixare 1-24 ore, în funcție de grosimea și proprietățile obiectului.
Follow-up de tratament. După clătire temeinică în jet de apă timp de 20-24 ore (apa trebuie sa fie incolore) de piese au fost plasate în 70% alcool pentru a elimina iodul din țesuturi diclorura de mercur precipită. În acest scop, un alcool de 70% se adaugă câteva picături de alcool 90% conținând 100 ml de 2 g iod și 3 g de iodură de potasiu, pentru a obține o soluție de culoare puternic ceai. Spălarea diclorură de mercur se efectuează în mai multe porțiuni iodați alcool, schimbându-l după 18-24 de ore înainte de terminarea iluminării (mercur diclorura precipitat de dizolvare decolora alcool).
După fixare, umplere de lichid Zenker recomandat în celloidin sau celloidin-parafină, deoarece umplerea parafină conduce la o contracție semnificativă și ridarea a structurilor de țesut.
Maksimov lichid (Zenker-formol). Este de fapt un Zenker lichid modificat, în care acidul acetic glacial este înlocuit cu formol. Dispozitivul de reținere este utilizat pe scară largă pentru studii de hematologie. Acesta oferă bună colorare a celulelor sanguine și a le permite să identifice granularitate specifice.

Compoziția și metoda de utilizare:
lichid Mueller
dicromat de potasiu 2,5g
Sulfat de sodiu 1 g
Apă distilată 100 ml
5 g de diclorură de mercur
Formol 10 ml

Timp de fixare 6 h. Grosimea bucăți de cel mai mare de 5 mm. Prelucrarea ulterioară și umplerea la fel, chiar și după fixarea în lichidul Zenker.
Dacă un Maksimov lichid se adaugă 10 ml de soluție de acid osmic 2% și crește timpul de fixare la 24 de ore, poate primi simultan grăsime osmirovanie.
Notă. diclorura Mercur este o otravă puternică, astfel încât consumul de reactiv și de depozitare necesită respectarea normelor prevăzute grupuri de substanțe A.
Fixation pe Navashin-Krîlov. Fixarea această metodă dă rezultate bune când nuclee colorate și structuri protoplasmatici cu hematoxilină de fier. Compoziție de blocare Navashin:
Acid soluție cromic 1% din 10 ml
Formalina 10% 10 '
Distilat 90 apă "
Acid acetic glacial (adăugat imediat înainte de fixarea) 2 '
Felii de 5 mm în grosime trebuie înregistrate 4-6 ch apoi clătite bine cu apă (24-36 ore), care rulează pentru a îndepărta resturile de acid cromic care afectează agenți de colorare.
GI Krîlov a sugerat mai înainte de biți de spălare transporta prin mai multe porțiuni de 5-10% formalină până când soluția terminare de colorare galbenă (formol îndepărta acidul cromic din țesut). Această procedură reduce timpul de spălare în apă.
de fluid Bouin. Este una dintre cele mai bune capturi. pătrunde relativ rapid în țesuturi, provocând o ușoară (2,5%) de comprimare a acestora. Foarte bune culori structuri de țesut. Folosit ca medicamente pentru revizuire și pentru studii subțiri și pentru fixarea embrionilor.
ingrediente:
soluție saturată de acid picric 75 ml
Formalina 25 "
Acid acetic glacial 5 '
lichide Drenarea a produs enumerate imediat înainte de fixare. Deoarece acidul picric este slab solubil în apă, este necesar să se prepare o soluție saturată în prealabil. Vasul a fost turnat 25-30 g acid cristalin și 1 litru de apă distilată fierbinte. Excesul de acid după răcire precipită și poate fi utilizat în prepararea unui nou lot de soluție. Soluția poate fi stocată pe termen nelimitat.
Durata materialului de fixare 2-24 ore, în funcție de dimensiunea obiectului. Cu toate acestea, mai lungi (mai multe zile) piesele de ședere în dispozitivul de fixare nu afectează calitatea de fixare și de prelucrare ulterioară.
După fixarea materialului transferat în alcool de 70-80% (pentru a îndepărta acidul picric), care este de 1-3 ori schimbare. Produce umple în parafină.
Notă. Obiect, fixat în lichidul Bouin, nu înmuiate complet celloidin.
Liquid Carnoy. Este un bun opritor pentru studii histologice (nucleu), și pentru multe metode histochimice (acizi nucleici, proteine, polizaharide). Dezavantajul este o ușoară contracție a citoplasmei și țesutului conjunctiv.
ingrediente:
etanol absolut 60 ml (poate fi înlocuit fără
96% alcool)
Cloroform 30 "
Acid acetic glacial 10 "
Carnoy lichid preparat înainte de fixare. Felii de 5 mm au fost fixate timp de 1-5 ore (în funcție de grosimea obiectului). După piesele de fixare transferate direct în etanol absolut (dacă opritorul a fost preparat în alcool 96%, piesele trebuie clătite de 2-3 ori în etanol 96% în cazul în care, dacă este necesar, acestea pot fi lăsate timp de 2-3 ore).
Notă. Trebuie avut grijă ca materialul a fost într-un opritor pentru nu mai mult decât este necesar pentru impregnarea sa completă, prelungirea duratei de fixare îmbunătățește aderența și sigilați obiectului.
Opritor FSO (formol, alcool, acid acetic) Brodsky.
Se recomanda pentru studierea structurii țesutului și analiza cantitativă citochimic a acizilor nucleici. Avantajul fixator FSO Carnoy, înainte de faptul că formaldehida inhibă activitatea enzimelor care distrug acizii nucleici (nucleaze) în celulele zăvorât, ADN-ul astfel cantitativ mai bine conservate și ARN.
Compoziția și metoda de utilizare:
formol nediluată neutre 3 părți
96% alcool etilic 1 parte
Acid acetic glacial 0,3 părți
Bucăți de țesut 2x2 sau 2x3 mm- timp de prelucrare de 1-4 ore, în funcție de proprietățile obiectului.
După piesele de fixare clătit cu apă timp de 12 ore sau (în scopuri citochimice) pentru același timp cu trei schimbări de alcool de 70%. Rapid deshidrata și se toarnă în ceara.
blocare Shabadash. Este recomandat ca cel mai bun de blocare pentru detectarea histochimică de glicogen (în special în cazul în care acesta este un sistem nervos central-pic).
ingrediente:

corp Feliile (nu mai mult de 3x3 mm) de blocare 3 ore în prima soluție, iar apoi migrează în a doua soluție timp de 3 h. Se spală în trei sau patru serii de alcool 70% timp de 2 h. Se toarnă în parafină sau celloidin.

Distribuiți pe rețelele sociale:

înrudit
© 2021 rum.MedruPRO.ru